Kit porcin réactif de la protéine de C/CRP ELISA, kit adapté aux besoins du client du sandwich ELISA

Kit porcin de la protéine C réactive ELISA avec haut Spesificity et sensibilité 

Cat.No E0048Po

Chaîne standard de courbe : 0.5ng/ml - 150ng/ml

Sensibilité : 0.25ng/ml

Taille : 96 puits

Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.

* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.

Utilisation prévue

Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la protéine C réactive porcine (également connue sous le nom de CRP) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.

Principe d'analyse

Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps porcin de CRP. CRP présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps porcin alors biotinylated de CRP est ajouté et lie à CRP dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated CRP. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de CRP porcin. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.

Réactif fourni

Collection de spécimen

Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.

Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.

L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.

Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.

Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.

Procédure d'analyse

1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.

2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.

3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.

4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anti-CRP anticorps 10μl aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.

5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.

6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.

7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.

8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.