48 Wells/96 le kit humain de Wells ELISA, serrent le kit humain du Leptin ELISA

96 haut ELISA kit sensible des puits pour le LEP humain

Cat.No EHU1559

Chaîne standard de courbe : 0.05ng/ml - 10ng/ml

Sensibilité : 0.021ng/ml

Taille : 96 puits

Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.

* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.

Précision

La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.

La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.

Cv (%) = SD/mean X 100

Intra-analyse : Cv<8>

Inter-analyse : Cv<10>

Utilisation prévue

Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise du Leptin humain (également connu sous le nom de LEP) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.

Réactif fourni

Note

• Des concentrations d'échantillon devraient être prévues avant d'être employée dans l'analyse. Si la concentration d'échantillon n'est pas dans la marge de la courbe standard, les utilisateurs doivent nous contacter pour déterminer l'échantillon optimal pour leurs expériences particulières.
• Des échantillons à employer d'ici 5 jours devraient être stockés aux échantillons 2-8°C. devraient aliquoted ou doivent être stockés à -20°C dans un délai de 1 mois ou à -80°C dans les 6 mois. Avoid a répété les cycles gel-dégel.
• Des échantillons devraient être apportés à la température ambiante avant de commencer l'analyse.
• Centrifugeuse pour rassembler l'échantillon avant emploi.
• Des échantillons contenant NaN3 ne peuvent pas être examinés pendant qu'il empêche l'activité de la peroxydase (HRP) de raifort sauvage.
• Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.
• Le Hemolysis peut considérablement effectuer la validité des résultats d'essai. Faites attention pour réduire au minimum le hemolysis.

Procédure d'analyse

1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps d'anti-LEP 10μl aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.

Références

Comings D.E., Gade R., Muhleman D., Peters W.R., MacMurray J.P.
Mole. Genet. Metab. 73:204- 210(2001)