Protéine obligatoire adaptée aux besoins du client de Mannma de kit du rat ELISA avec 2 heures de temps d'analyse

Kit obligatoire adapté aux besoins du client du Lectin MBP MBL ELISA de mannane obligatoire de protéine de Mannma de rat

Ra de Cat.No E0629

Chaîne standard de courbe : 0.5ng/ml - 100ng/ml

Sensibilité : 0.25ng/ml

Taille : 96 puits

Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.

le produit de *This sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.

Principe d'analyse

Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du rat MBP/MBL. MBP/MBL présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated du rat MBP/MBL est ajouté et lie à MBP/MBL dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated MBP/MBL. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité du rat MBP/MBL. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.

Utilisation prévue

Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la protéine obligatoire de Mannma de rat, Lectin obligatoire de mannane (également connu sous le nom de MBP/MBL) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.

Précautions

• Avant l'utilisation, le kit et l'échantillon devraient être chauffés naturellement à la température ambiante 30 minutes.
• Cette instruction doit être strictement suivie dans l'expérience.
• Une fois que le nombre désiré de bandes a été enlevé, rescellez immédiatement le sac pour protéger le rester contre la détérioration. Couvrez tous les réactifs si non utilisable.
• Make sure introduisant à la pipette l'ordre et le taux d'addition de bien-à-bien en introduisant à la pipette des réactifs.
• Les astuces de pipette et le scelleur de plat à disposition devraient être propres et jetables pour éviter la contamination transversale.
• Évitez d'employer les réactifs de différents groupes ensemble.
• La solution B de substrat est sensible à la lumière, n'exposent pas la solution B de substrat pour s'allumer pendant longtemps.
• Arrêtez la solution contient l'acide. Veuillez porter l'oeil, la main et la protection de la peau en employant ce matériel. Évitez le contact de la peau ou des muqueuses avec du réactif de kit.
• Le kit ne devrait pas être employé au delà de la date d'échéance.

Réactif fourni

Préparation de réactif

Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.

La norme reconstituent le 120μl de la norme (128ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une solution de l'action standard 64ng/ml. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2 de la solution d'action standard (64ng/ml) avec le diluant standard pour produire les solutions 32ng/ml, 16ng/ml, 8ng/ml et 4ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :

Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.

Procédure d'analyse

1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.

2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.

3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.

4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps de 10μl anti-MBP/MBL aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.

5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.

6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.

7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.

8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.

Résumé

1. Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.

2. Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure à 37°C.

3. Lavez le plat 5 fois.

4. Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes à 37°C.

5. Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.

6. Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.

Referances

« l'expression Étape-spécifique de la protéine de base de myelin dans les oligodendrocytes implique la répression de Nkx2.2-mediated qui est soulagée par le facteur de la transcription Sp1. »
Wei Q., Miskimins W.K., Miskimins R.
J. Biol. chim. 280:16284- 16294(2005)